Bộ phim dựa trên tiểu thuyết nổi tiếng cùng tên gây tranh cãi của Dan Brown. Câu chuyện xảy ra khi người quản lý bảo tàng Louvre đột nhiên bị ám sát và nạn nhân để lại mật thư viết bằng máu và mô phỏng lại bức họa nổi tiếng của Da Vinci bằng chính thân xác mình. Lời nhắn được gửi đến giáo sư Robert Landon, chuyên gia ký hiệu và biểu tượng học. Cùng cô cháu gái Sophie của nạn nhân, Robert Landon vừa phải chạy trốn cảnh sát, bởi ông là nghi can số 1, vừa phải giải mã hàng loạt câu đố để tìm được chân tướng cuối cùng của vụ việc cũng như một bí mật được che giấu hơn 2000 năm có thể thay đổi đức tin của con người trên toàn thế giới: Chiếc chén thánh trong truyền thuyết là có thật. Và nó đang được giấu ở đâu đó. Dựa vào những tài liệu có thật lẫn tính hư cấu huyền ảo, bộ phim khiến người xem tự đặt câu hỏi về sự hiểu biết của bản thân với những điều huyền bí trong lịch sử.